高表达miR-17-92的L1210细胞系的构建与鉴定

作者：黄晓; 许亚梅; 石凤芹; 张冬梅; 王珍珍; 张雅月; 饶恩于; 孙波; 赵勇

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2013, 7(04): 1631-1638.

• miR-17-92
• L1210细胞系
• 核转染
• 病毒转染

目的以小鼠白血病L1210细胞系为基础,构建稳定高表达miR-17-92的细胞系。方法采用核转法,将miR-17-92的过表达质粒MSCV-LMP-miR-17-92、对照质粒MSCV-LMP转导入L1210细胞系;利用含嘌呤霉素选择、荧光倒置显微镜下观察、流式细胞术等技术筛选阳性克隆并检测转染效率;并用qPCR技术验证构建的阳性细胞系中的靶标miRNA表达水平,验证miR-17-92相对过表达比例。结果成功将MSCV-LMP-miR-17-92、MSCV-LMP转入L1210细胞系,转染效率较高,利用含嘌呤霉素的培养基筛选核转后的细胞,阳性率达到99%以上,miR-17-92簇中的靶标miRNA表达量持续。结论通过核转仪转染法成功将MSCV-LMP-miR-17-92、MSCV-LMP(对照质粒)转入L1210细胞系,并通过长期药物筛选获得了稳定表达细胞系,为进一步研究该基因在肿瘤中的作用提供了实验平台。

• 单位
  中国科学院动物研究所; 北京中医药大学东直门医院; 北京中医药大学; 膜生物学国家重点实验室