奶牛子宫内膜基质细胞原代培养方法的改进与细胞鉴定

作者：张晴越; 王亨; 崔璐莹; 陶璐瑶; 李建基^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (18): 79-184.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.11.0129

• 奶牛
• 子宫内膜
• 基质细胞
• 原代培养优化
• 酶消化法
• 细胞生长曲线

为了优化奶牛子宫内膜基质细胞的分离培养方法,以提高奶牛子宫内膜基质细胞的培养效率和细胞纯度,试验采用常规胰蛋白酶和胶原酶交替消化过筛法分离细胞,在样本选择、消化酶配方和筛网孔径方面进行了优化改进并传代纯化,通过细胞形态学观察、细胞生长曲线、免疫组化鉴定进行细胞鉴别。结果表明:处于发情期的子宫样本采用0.25%胰蛋白酶和0.25%Ⅱ型胶原酶及0.15 g/L DNaseⅠ的次序消化,经大孔径筛网过筛后获得基质细胞,纯度较高,且细胞活力更好;采用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA传代消化可缩短传代时间;基质细胞贴壁后呈长梭形和多角形两种形态;经免疫组化鉴定该细胞具有波形蛋白免疫反应性,与子宫内膜切片中波形蛋白组织化学结果一致,表明其为来源于内膜基质层的基质细胞。奶牛子宫内膜基质细胞生长曲线呈"S"型,符合细胞生长的规律。说明优化培养方法后可更便捷、高效地分离培养较高纯度的奶牛子宫内膜基质细胞。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 扬州大学