氧化应激、PSMB5、TFEB和溶酶体在亚砷酸钠致大鼠肝损伤中的作用

作者：汪红铃; 时明阳; 毕顶念; 支海燕; 胡倩; 胡勇^*

来源：环境与职业医学, 2022, 39(10): 1134-1139.

• 砷
• 氧化应激
• 肝损伤
• 溶酶体
• 蛋白酶体β5亚基
• 转录因子EB

[背景]地方性砷中毒肝损伤较为严重。研究表明，氧化应激、蛋白酶体β5亚基(PSMB5)、调节转录因子EB(TFEB)和溶酶体与肝损伤有关，但它们与砷中毒肝损伤的具体联系尚不清楚。[目的]利用课题组前期建立的亚砷酸钠(NaAsO2)致大鼠肝损伤模型，检测肝组织中PSMB5、TFEB和溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)的表达。[方法] 24只SPF级Wistar大鼠随机分为对照组，低、中、高浓度组，每组6只，雌雄各半；染毒浓度分别为0、25、50、100 mg·L-1 NaAsO2水溶液，染毒24周。染毒结束后，麻醉大鼠取肝脏。采用化学比色法检测肝组织碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、过氧化氢酶(CAT)水平；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肝组织脂质过氧化物(LPO)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、LAMP1、组织蛋白酶D(CTSD)水平；采用实时荧光定量PCR法检测肝组织PSMB5、TFEB转录表达水平；采用免疫组化检测肝组织PSMB5、TFEB、磷酸化TFEB(p-TFEB)蛋白表达情况。[结果]化学比色法和ELISA法结果显示：与对照组相比，各染砷组大鼠肝匀浆ALP、TBA、LAMP1，中、高浓度组ALT、LPO，高浓度组4-HNE、CTSD水平均升高，而各染砷组CAT活性均降低(P <0.05)。实时荧光定量PCR结果显示：各染砷组肝组织PSMB5、TFEB转录水平与对照组相比均下降(P <0.05)。免疫组化结果显示：与对照组比较，各染砷组肝组织PSMB5，中、高浓度组TFEB蛋白表达均下降，而各染砷组p-TFEB蛋白表达均升高(P <0.05)；随染砷浓度增加，TFEB蛋白表达在胞核逐渐减弱，p-TFEB蛋白表达在细胞质中逐渐增强，p-TFEB在胞核未见表达。Pearson相关性分析结果显示：肝组织PSMB5与CAT呈正相关(r=0.818,P <0.05)，与4-HNE、p-TFEB呈负相关(r=-0.582,r=-0.899;P <0.05);TFEB与CTSD、LAMP1均呈负相关(r=-0.457,r=-0.564;P <0.05);CTSD与ALT、ALP均呈正相关(r=0.529、r=0.485;P <0.05)。[结论] NaAsO2长期暴露可诱导氧化应激发生，抑制PSMB5和TFEB表达，促使细胞质中p-TFEB累积增多，活性TFEB入核减少，溶酶体受损，引起肝脏损伤。

• 单位
  贵州医科大学