RsrA-CFP融合蛋白的克隆表达及圆二色性分析

作者：陈欢; 叶邦策

来源：化学与生物工程, 2012, 29(08): 51-55.

• 天蓝色链霉菌
• RsrA
• CFP
• 克隆
• 表达
• 圆二色性

以天蓝色链霉菌M145基因组作模板,扩增σR(sigR)的anti-sigR因子基因rsrA,得到了333bp基因;以质粒pECFP-N1作模板,扩增青色荧光蛋白基因cfp,得到了744bp基因。将两个基因融合串联,构建rsrA/cfp/pET-28a(+)融合表达质粒。利用荧光检测技术,确定大肠杆菌BL21(DE3)在OD600为0.5时,用1mmol.L-1 IPTG进行诱导能大量表达融合蛋白RsrA-CFP。用镍柱亲和层析分离纯化RsrA-CFP蛋白,并用SDS-PAGE鉴定其分子量为40kD左右。利用圆二色性初步测定RsrA-CFP蛋白的CD值,经CDNN软件分析得到:螺旋结构占32.2%、平行结构占8.0%、反向平行结构占9.3%、β折叠占16.7%、无规则卷曲占34.4%,为RsrA蛋白的功能研究奠定了基础。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室