丹参酮A通过调节ABCE1抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬

作者：邢磊; 乔炜超^*

来源：中华危重病急救医学, 2023, 35(06).

• 丹参酮ⅡA
• 缺氧/复氧损伤
• H9C2心肌细胞
• 自噬
• 凋亡
• 三磷酸腺苷结合盒转运体E1

目的探讨丹参酮ⅡA对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法取对数生长期H9C2心肌细胞, 将其分为空白对照组、缺氧/复氧模型组及丹参酮ⅡA低、中、高剂量组(分别于制模后给予50、100、200 mg/L丹参酮ⅡA)。选取治疗效果较好的剂量进行后续研究, 将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-NC组和丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-ABCE1组, 用过表达质粒pcDNA3.1-ABCE1和pcDNA3.1-NC转染后进行相应处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组H9C2细胞活性;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组H9C2细胞三磷酸腺苷结合盒转运体E1(ABCE1)、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)以及自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、p62的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组H9C2细胞上述指标的蛋白表达水平。结果①细胞活性及ABCE1表达:丹参酮ⅡA可抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞活性, 中剂量即可达到显著效果〔(0.95±0.05)%比(0.37±0.10)%, P<0.01〕, ABCE1的mRNA和蛋白表达显著降低〔ABCE1 mRNA(2-ΔΔCt):2.02±0.13比3.74±0.17, ABCE1蛋白(ABCE1/GAPDH):0.46±0.04比0.68±0.07, 均P<0.05〕。②凋亡相关蛋白表达:中剂量丹参酮ⅡA可抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞凋亡〔(28.26±2.52)%比(45.27±3.07)%, P<0.05〕。与缺氧/复氧模型组比较, 中剂量丹参酮ⅡA可明显下调缺氧/复氧诱导的H9C2细胞中Bax和caspase-3的蛋白表达, 明显上调Bcl-2的蛋白表达〔Bax(Bax/GAPDH):0.28±0.03比0.47±0.03, caspase-3(caspase-3/GAPDH):0.31±0.02比0.44±0.03, Bcl-2(Bcl-2/GAPDH):0.53±0.02比0.37±0.05, 均P<0.05〕。③自噬相关蛋白表达:与空白对照组比较, 缺氧/复氧模型组细胞LC3阳性率明显增加, 丹参酮ⅡA中剂量组细胞LC3阳性率则明显减少〔(20.67±3.09)%比(42.67±3.86)%, P<0.01〕。与缺氧/复氧模型组比较, 中剂量丹参酮ⅡA可以明显下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的蛋白表达〔Beclin-1(Beclin-1/GAPDH):0.27±0.05比0.47±0.03, LC3Ⅱ/Ⅰ比值:0.24±0.05比0.47±0.04, p62(p62/GAPDH):0.21±0.03比0.48±0.02, 均P<0.05〕。④过表达ABCE1质粒转染后凋亡和自噬相关蛋白表达:与丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-NC组比较, 丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-ABCE1组Bax、caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的蛋白表达水平均明显上调, Bcl-2的蛋白表达水平明显下调。结论 100 mg/L的丹参酮ⅡA即可通过调节ABCE1的表达水平抑制心肌细胞自噬和凋亡, 从而在缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤起到保护作用。