微小RNA-940抑制骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭

作者：郭亚旗; 胡祥; 漆白文; 喻爱喜^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(03): 531-534.

• 骨肉瘤
• 微小RNA
• 迁移
• 侵袭

目的探讨微小RNA-940(miR-940)对迁移和侵袭增强因子1(MIEN1)的作用, 对人骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭等能力的影响。方法根据对MG63(武汉大学中南医院医学科学研究中心)的转染处理, 将其分为miR-940模拟物(mimics)组、控制(control)对照组、miR-940抑制剂(inhibitor)组和空白(Blank)对照组。分析武汉大学中南医院骨科通过手术切除的12例骨肉瘤病理组织, 采用世界卫生组织(WHO)病理分级标准进行良恶性分级, Ⅰ级5例, Ⅱ级3例, Ⅲ级4例。采用免疫组织化学分析MIEN1与肿瘤恶性程度的相关性。体外培养人骨肉瘤细胞MG63及正常成骨细胞hFOB1.19, 实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-940及MIEN1表达水平, 蛋白质印迹法(Western blot)检验MIEN1蛋白表达。对MG63细胞分组转染miR-940模拟物(mimics)、控制(control)对照、抑制剂(inhibitor)和空白对照, 48 h后采用实时荧光定量PCR检验miR-940, Western blot检验MIEN1蛋白表达。划痕实验评估转染后细胞的迁移能力。Transwell侵袭实验评价转染后细胞的侵袭能力。采用两样本t检验, 多样本方差分析, Pearson相关性分析。结果 MIEN1在不同恶性程度的骨肉瘤中的表达水平, 与恶性程度呈正相关(r=0.832, P<0.05)。骨肉瘤细胞MG63比正常成骨细胞的miR-940表达水平更低(4.37±0.61比12.41±1.05), 差异有统计学意义(t=11.464, P<0.01), 而MIEN1表达水平更高(21.01±1.01比5.49±0.38), 差异有统计学意义(t=-24.954, P<0.01), Western blot结果显示miR-940与MIEN1的表达水平呈负相关(r=-0.914, P<0.01)。转染后, 模拟物组miR-940水平高于控制对照及空白对照组, 而抑制剂组则低于对照组(51.16±4.27比4.19±0.47比4.36±0.29比1.18±0.15), 差异有统计学意义(F=372.327, P<0.01), Western blot结果表明MIEN1的蛋白表达水平为模拟物组比对照组表达降低77.89%(t=3.174, P<0.05), 而抑制剂组比对照组表达增高141.78%(t=-4.318, P<0.05)。划痕实验证实迁移能力miR-940模拟物组低于控制对照和空白对照组, 而抑制剂组则高于对照组(27.48±0.28比51.05±2.65比50.86±0.88比74.58±1.00), 差异有统计学意义(F=1252.615, P<0.01)。在MG63细胞侵袭能力方面, miR-940模拟物组能力相较于控制对照和空白对照组降低, 而抑制剂组高于对照组(58.20±5.26比79.40±6.19比79.80±5.36比101.40±6.07), 差异有统计学意义(F=47.313, P<0.05)。结论 MIEN1与骨肉瘤的恶性程度呈现正相关, miR-940在转录后, 调控MIEN1表达水平, 抑制骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭。

• 单位
  武汉大学中南医院