膦丝菌素乙酰转移酶抗原表位分析及快速ELISA定量检测方法的建立

作者：梁雨欣; 李忠鹏; 张春雨; 侯吉超; 李小宇^*; 王永志^*

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(03): 591-598.

• Bar基因
• 单克隆抗体
• 抗原表位
• 双抗夹心ELISA (DAS-ELISA)

随着转基因大豆(Glycine max)市场的扩大,我国对转基因大豆的食品安全、环境风险等问题争议日渐加剧。越来越多的国家要求对转基因食品进行标识,部分国家对转基因成分含量亦有要求。为了建立转Bar基因大豆的快速、有效检测方法,对转Bar基因大豆进行定量检测,本研究以纯化的膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)蛋白为抗原免疫小鼠(Mus musculus),成功制备了18株特异性良好的PAT单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb),利用在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的PAT分段蛋白筛选到一组能进行夹心ELISA的配对单克隆抗体9F5和3G12,并以这对单抗为基础建立了PAT快速定量双抗夹心ELISA (double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA)检测方法。该方法以9F5为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3G12经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记后以2μg/mL的工作浓度与抗原在37℃共同孵育30 min,室温避光显色15～20 min。该检测方法检测限为1.69 ng/mL,对PAT蛋白的检测范围为0.5～8.0μg/mL,板内板间变异系数均小于10%。该法灵敏度高、稳定性好,1 h即可完成检测,为转Bar基因大豆的快速定量检测提供了技术支撑。

• 单位
  吉林省农业科学院植物保护研究所; 吉林农业大学; 中国农业科学院植物保护研究所