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摘要
目的:克隆可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble vascular endothelial growth factor receptor1,sVEGFR1或sFLT-1)基因的第1~3个Ig样区域,并在原核表达系统中表达。方法:采用RT-PCR的方法从人脐静脉内皮细胞中扩增sFLT-1基因的第1~3个Ig样区域,并克隆到PMD-18T载体中,经酶切及测序证实。然后采用BamHI/EcoRI双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,并转化至E·coliBL21菌株。应用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行Western Blot分析。结果:经RT-PCR成功扩增了sFLT-1基因第1~3个Ig样区域;成功地克隆了sFLT-1基因第1~3个Ig样区域;经IPTG诱导的重组质粒pGEX-sFLT表达出相对分子质量约为62×103的融合蛋白,与预期的结果相符。结论:成功克隆sFLT-1基因第1~3个Ig样区域,并在E·coliBL21中表达出GST-sFLT融合蛋白,为进一步研究sFLT-1蛋白在肿瘤治疗中的作用奠定了技术基础。
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