科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 克隆表达丙酸代谢关键酶基因prpB、prpC和prpD,分析预测相应表达蛋白潜在的结构和功能，为铜绿假单胞菌新型抗菌靶点的开发奠定基础。方法 对铜绿假单胞菌中丙酸代谢关键基因prpB、prpC、prpD克隆入大肠埃希菌，构建相应的基因工程重组菌，通过镍柱亲和层析纯化重组蛋白，SDS-PAGE检测PrpB、PrpC和PrpD蛋白的分子质量及纯度。利用生物信息学软件预测PrpB、PrpC和PrpD蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和三级结构。结果 重组菌用0.5 mmol/L IPTG于16℃条件下诱导，表达的重组蛋白PrpB、PrpC和PrpD主要以可溶性形式存在于上清中，经Ni柱亲和层析纯化得到相对分子质量分别为32×103、42×103、55×103的目的蛋白，与预期一致。生物信息学分析PrpB、PrpC和PrpD蛋白分别由298、375、494个氨基酸组成，相对分子质量分别为32.14×103、41.69×103、54.88×103,等电点分别为5.33、6.03、6.15。3种蛋白均为亲水性蛋白，无信号肽，无跨膜结构。蛋白亚细胞定位于细胞质中，α螺旋和无规则卷曲是PrpB、PrpC和PrpD二级结构的主要蛋白质元件。结论 成功表达了重组蛋白PrpB、PrpC和PrpD并进行了纯化。生物信息学预测PrpB、PrpC和PrpD含有丰富的α螺旋和无规则卷曲结构，为揭示PrpB、PrpC和PrpD蛋白的结构及丙酸代谢在铜绿假单胞菌中的生物学功能奠定了理论基础。
-
单位西北大学; 长治医学院
