基因治疗用pUC118-ski质粒DNA纯化工艺的建立及其质量控制

作者：彭艳; 李平; 刘苹; 周元国

来源：中国生物制品学杂志, 2013, (10): 1483-1487.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001915

• ski基因
• 重组质粒
• 基因治疗
• 层析
• 质量控制 ski gene
• Recombinant plasmid
• Gene therapy
• Chromatography
• Quality control

目的建立基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,并进行质量鉴定。方法采用碱裂解法粗提质粒,PEG/MgCl2沉淀法初步纯化后,依次通过Sepharose 6 FF分子筛层析、PlasmidSelect Xtra亲和层析和SOURCE30Q离子交换层析纯化质粒DNA。纯化的质粒DNA经琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋质粒的比例;紫外分光光度计测定质粒的A260和A280值,以A260/A280比值评价其纯度;CCK-8法检测质粒促原代培养的大鼠皮肤成纤维细胞的增殖活性;BCA法和鲎试剂凝胶法分别检测质粒DNA中残留的蛋白质和内毒素含量;PCR法检测质粒中细菌基因组DNA的含量。结果经Seph...

• 单位
  大坪医院; 第三军医大学; 创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室