汾远2号远志的rDNA ITS等位基因特异性PCR鉴别研究

作者：李娟; **丹; 孔冉冉; 田洪岭; 张福生^*; 秦雪梅; 马存根^*

来源：山西医科大学学报, 2019, 50(08): 1143-1148.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2019.08.022

• 远志
• 汾远2号
• ITS
• 等位基因特异性引物
• 分子鉴别

目的设计出鉴别汾远2号远志的特异性PCR引物,建立快速鉴别汾远2号远志的方法。方法利用植物核糖体DNA(r DNA)的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)通用型引物扩增远志样品,并对所有样品进行双向测定,采用DNAMAN软件对远志样品r DNA ITS序列进行比对,找到汾远2号远志(Polygala tenuifolia,简称FY2)的等位基因差异位点,并利用NCBI网上已有的远志序列以及作者测序得到的卵叶远志(P. sibirica)序列和FY2序列比对,进行等位基因差异位点的验证。最后根据FY2的碱基差异位点,采用Primer 5. 0软件设计特异性PCR引物,用于FY2的特异性PCR鉴别。结果测序所得的序列与NCBI中远志的相似度高达99. 36%。找到了两个FY2的等位基因差异位点,第123位点为T,其余样品均为A,第553位点为T,其余样品均为C。设计了4对特异性PCR引物对FY2进行特异性PCR扩增,在约463 bp处出现单一的扩增条带,而其他远志及卵叶远志则无相应的扩增条带。结论等位基因特异性PCR能有效地从远志和卵叶远志药材中鉴别出汾远2号远志,具有准确、高效、灵敏、简便的特点。

• 单位
  山西省农业科学院经济作物研究所; 山西大学; 石家庄四药有限公司; 化学化工学院; 山西中医药大学