AQP5对胃癌干细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响

作者：高培垚; 汪非凡; 田恒金; 陈阿敏; 王娜; 张强^*

来源：山西医科大学学报, 2023, 54(07): 894-902.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2023.07.003

• 胃癌干细胞
• AQP5
• 增殖
• 迁移
• 侵袭
• 干性

目的 探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell, GCSC)生物学行为的影响及机制。方法 将胃癌细胞AGS通过无血清悬浮成球培养技术富集胃癌干细胞(AGS-GCSC)。通过流式细胞术检测AGS和无血清培养富集的AGS-GCSC中胃癌干性标志物CD133的阳性率来鉴定所富集的AGS-GCSC是否符合后续实验要求。Western blot和qRT-PCR检测AGS和富集的AGS-GCSC中AQP5及胃癌干性标志物八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和CD133的表达。运用慢病毒技术将富集的AGS-GCSC分为两组：sh-NC组(阴性对照组)和sh-AQP5组(AQP5低表达组)。通过CCK-8、平板克隆、Transwell、干细胞成球实验检测sh-NC组和sh-AQP5组增殖、迁移、侵袭和成球能力。通过Western blot技术检测sh-NC组和sh-AQP5组中胃癌干性标志物OCT4、CD133的表达。Western blot检测sh-NC组和sh-AQP5组CAMKK2/AMPK通路相关蛋白(磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK)以及自噬相关蛋白(ATG7、P62、LC3Ⅱ)的表达情况。结果 流式细胞术结果显示，与胃癌细胞AGS相比，AGS-GCSC中CD133的阳性率明显增加(P<0.05),符合后续实验需求。Western blot和qRT-PCR结果显示，与胃癌细胞AGS相比，无血清培养富集的AGS-GCSC中高表达AQP5和胃癌干性标志物OCT4、CD133(P<0.05)。CCK-8、平板克隆、Transwell及成球实验表明，与sh-NC组相比，sh-AQP5组AGS-GCSC增殖、迁移、侵袭和成球能力下降(P<0.05)。另外，Western blot实验结果显示，与sh-NC组相比，sh-AQP5组AGS-GCSC中干性标志物OCT4、CD133表达下调(P<0.05)。Western blot结果显示，与sh-NC组相比，sh-AQP5组磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK的蛋白水平下调，自噬相关蛋白ATG7、LC3Ⅱ表达降低，P62表达增加(P<0.05)。结论 AQP5可能通过调控CAMKK2/AMPK通路抑制自噬影响GCSC的生物学功能。

• 单位
  蚌埠医学院; 蚌埠医学院第一附属医院