一种重组人睫状神经营养因子突变体的分离纯化及结构鉴定

作者：冯翠; 赵大伟; 张纯; 王健; 秦培勇; 刘永东; 苏志国

来源：中国生物工程杂志, 2013, (10): 21-27.

DOI：10.13523/j.cb.20131004

• 重组人睫状神经营养因子
• 半胱氨酸
• 可溶表达
• 分离纯化
• 组合层析 Recombinant human ciliary neurotrophic factor
• Cystine
• Soluble expression
• Separation and purification
• Combinatorial chromatography

研究并建立从细胞破碎上清中获得一种含游离半胱氨酸的重组人睫状神经营养因子突变体(CNTF-C17)的分离纯化方法并对纯化产物的结构及活性进行表征。通过疏水层析、离子交换和亲和层析的组合层析路线,能实现目标蛋白与其它杂蛋白的有效分离。组合层析后CNTF-C17的纯化倍数可达11.4,收率35.5%。反相高效液相色谱和凝胶过滤层析证明产物纯度可达到98%以上,且以单体形式稳定存在,无分子间二硫键结合的二聚体。质谱测得产物分子量与理论值一致,圆二色光谱和荧光光谱证明纯化产物具有正确的二、三级结构,TF-1.CN5a.1细胞增殖活性检测表明纯化产物比活达到2.1×106IU/mg。因此,为这种新的CN...

• 单位
  生化工程国家重点实验室; 中国科学院过程工程研究所; 北京化工大学; 四川大学