VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能

作者：贺俊; 王慧明; 姚航平

来源：浙江大学学报(医学版), 2006, 35(03): 281-286.

DOI：10.3785/j.issn.1008-9292.2006.03.009

• 血管内皮生长因子类/代谢
• 血管内皮生长因子类/遗传
• 3T3细胞
• 基因表达
• 转染
• 质粒

目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入M C 3T 3-E 1细胞。细胞经G 418加压有限稀释筛选,采用EL ISA法、W estern b lot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV 304)的增殖活性影响。结果:通过基因测序表明获得的VEGF 165和VEGF 121与G eneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF 165/pcDNA 3.1(+)质粒和VEGF 121/pcDNA 3.1(+)质粒,EL ISA及W estern b lot检测结果均表明VEGF 165和VEGF 121基因转染M C 3T 3-E 1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV 304细胞生长。结论:基因转染的M C 3T 3-E 1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。

• 单位
  浙江大学医学院附属第一医院