基于miR-224-5P调控的IL6ST/JAK/STAT信号通路在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用

作者：赵鑫; 杨静^*; 辛向阳

来源：眼科新进展, 2023, 43(05): 357-362.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2023.0072

• 糖尿病视网膜病变
• miR-224-5P
• IL6ST/JAK/STAT通路

目的 探讨miR-224-5P在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达变化及其在高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中的作用和机制。方法 抽取DR患者及健康人群各6名的外周血，RT-qPCR检测miR-224-5P相对表达量。将正常培养的ARPE-19细胞随机分成高糖组(给予30 mmol·L-1高糖)、高糖+miR-224-5P mimics组(转染100 nmol·L-1miR-224-5P mimics后给予30 mmol·L-1高糖)、高糖+miR-224-5P inhibitor组(转染100 nmol·L-1miR-224-5P inhibitor后给予30 mmol·L-1高糖)、高糖+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L-1OE-IL6ST后给予30 mmol·L-1高糖)和高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L-1miR-224-5P mimics和100 nmol·L-1 OE-IL6ST后给予30 mmol·L-1高糖),CCK-8检测细胞活力，Transwell检测细胞迁移率，双荧光素酶实验验证miR-224-5P与IL6ST的靶向关系，Western blot检测IL6ST、P-JAK及P-STAT蛋白表达，ELISA检测细胞中IL-1β、 IL-6及TNF-α蛋白表达水平。通过过表达IL6ST进一步验证miR-224-5P是否通过IL6ST/JAK/STAT通路发挥作用。结果 DR患者外周血中miR-224-5P mRNA相对表达量显著低于健康人群(P<0.001)。与高糖组相比，高糖+miR-224-5P mimics组细胞活力、细胞迁移率增高，高糖+miR-224-5P inhibitor组细胞活力、细胞迁移率降低(均为P<0.001)。双荧光素酶实验检测结果证实IL6ST是miR-224-5P调控的靶基因。与高糖组相比，高糖+miR-224-5P mimics组细胞的IL6ST蛋白表达水平降低，P-JAK和P-STAT蛋白表达水平升高(均为P<0.05);高糖+miR-224-5P inhibitor组细胞的IL6ST蛋白表达水平升高(P<0.05),P-JAK和P-STAT蛋白表达水平降低(均为P<0.05)。与高糖组相比，高糖+miR-224-5P mimics组细胞的IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平均下降(均为P<0.01),高糖+miR-224-5P inhibitor组细胞的IL-1β、 IL-6及TNF-α蛋白表达水平均显著上升(均为P<0.01)。高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组细胞活力和细胞迁移率均较高糖+miR-224-5P mimics组显著降低(均为P<0.001)。与高糖+OE-IL6ST组相比，高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组细胞的P-JAK和P-STAT蛋白表达水平均升高(均为P<0.001);与高糖+miR-224-5P mimics组相比，高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组细胞的P-JAK和P-STAT蛋白表达水平均降低(均为P<0.001)。结论 miR-224-5P在DR患者血液中表达降低，过表达miR-224-5P可降低高糖引起的炎症因子表达，并可通过IL6ST/JAK/STAT信号通路增加高糖诱导的ARPE-19细胞活力及细胞迁移率，从而调控DR的发生和发展。

• 单位
  内蒙古科技大学包头医学院; 内蒙古包钢医院