阿魏酸对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

作者：音金萍; 卓少元^*

来源：中国药房, 2021, 32(13): 1565-1571.

• 阿魏酸
• 人肝癌HepG2细胞
• 信号转导蛋白及转录激活子3
• 胱天蛋白酶3
• 波形蛋白

目的:研究阿魏酸对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:采用CCK-8法筛选阿魏酸的给药浓度;采用Western blot法筛选白细胞介素6(IL-6)诱导磷酸化信号转导蛋白及转录激活子3(p-STAT3)蛋白高表达的HepG2细胞模型的最佳造模浓度。将HepG2细胞分为空白对照组、模型组、阿魏酸组(0.5 mmol/L)和阳性对照组(p-STAT3抑制剂C188-9,10μmol/L),除空白对照组外,模型组加入IL-6、各给药组加入IL-6和相应药物分别进行培养。采用CCK-8法、Transwell法和Annexin V-FITC/PI双染色法分别检测各组细胞存活率、侵袭数和早期、晚期凋亡率;采用Western blot法检测各组细胞中p-STAT3、胱天蛋白酶3(caspase-3)、锌指蛋白(ZBP-89)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。基于PDB蛋白数据库,以STAT3高度相似晶体结构1BG1为对接模板,以Tyr705周围的区域为假定的结合口袋,进行阿魏酸与STAT3蛋白的分子对接分析。结果:选择以0.5 mmol/L阿魏酸干预HepG2细胞48 h作为后续实验条件,以50 ng/mL IL-6为造模条件。与空白对照组比较,模型组细胞侵袭数和p-STAT3/STAT3比值、vimentin蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05或P<0.01),细胞晚期凋亡率和caspase-3蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,阿魏酸组和阳性对照组细胞存活率、侵袭数、p-STAT3/STAT3比值和vimentin蛋白表达水平均显著减少或降低(P<0.05或P<0.01),细胞早期凋亡率(阿魏酸组除外)、晚期凋亡率和caspase-3、ZBP-89(阳性对照组除外)蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果表明,阿魏酸的羧酸基团与Asn581、Lys591分别存在1.9?、2.0?的氢键作用,结合能为-4.4 kcal/mol。结论:阿魏酸可能通过与STAT3磷酸化位点直接结合来抑制p-STAT3的活性;并可通过STAT3依赖性途径上调caspase-3蛋白表达,或可通过STAT3非依赖性途径上调ZBP-89蛋白表达,进而下调vimentin蛋白表达,从而抑制HepG2细胞的增殖、侵袭与凋亡。

• 单位
  基础医学院; 广西中医药大学