人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文)

作者：梁羽; 梁德生; 薛志刚; 龙志高; 邬玲仟; 潘乾; 胡艺俏; 戴和平; 夏昆; 夏家辉

来源：中华医学遗传学杂志, 2005, (05): 493-496.

• 杜氏肌营养不良
• 人源载体
• 基因治疗
• 微小肌营养不良蛋白
• 绿色荧光蛋白

目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。

• 单位
  医学遗传学国家重点实验室; 中南大学