同源重组与Gibson Assembly方法构建腺病毒载体

作者：邓楚钟; 潘耀振

来源：贵阳医学院学报, 2016, 41(04): 430-435.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.04.018

• 腺病毒
• 疫苗
• 重组载体
• Gibson Assembly

目的:对比同源重组与Gibson Assembly两种方法构建腺病毒载体的效率。方法:增殖并提取AD4DNA,分别用同源重组与Gibson Assembly两种方法,将AD4 DNA镶嵌入p BR322质粒,构建出携带有全长AD4DNA的腺病毒载体,并进行PCR和测序鉴定,对比两种方法构建腺病毒载体的筛选效率。结果:两种方法均能构建出正确的腺病毒载体;筛选同源重组法1 000个菌落中,鉴定360个,仅有1个菌落;Gibson Assembly法112个菌落数中,鉴定其中10个,有3个阳性。结论:Gibson Assembly方法比传统同源重组方法在构建腺病毒载体时更有效。

• 单位
  贵州医科大学