无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性检测

作者：张露珊; 董靖; 周顺; 刘永涛; 胥宁; 杨秋红; 艾晓辉^*

来源：华中农业大学学报, 2020, 39(04): 99-104.

DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2020.04.014

• 无乳链球菌
• 分选酶A
• 催化活性
• 靶标
• 荧光共振能量转移
• 活性检测

以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板,通过PCR扩增出srtAΔN82基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体,测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间对表达产物的影响,利用亲和层析和离子交换层析纯化蛋白,并使用荧光共振能量转移法测定蛋白活性。结果显示,试验构建的pGEX-6p-1-srtAΔN82载体转化至BL21(DE3)后,在37℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导表达6 h后可得到大量的可溶性蛋白,且纯度大于85%。纯化后的SrtAΔN82与底物作用后,可显著提高反应体系的荧光强度,表明得到的SrtAΔN82具有较好的生物学活性。

• 单位
  中国水产科学研究院长江水产研究所; 生命学院; 上海海洋大学