钩端螺旋体c-di-AMP结合蛋白调控钾离子转运

作者：戴欣珏; 姚丽琴; 陈婧; 胡玮琳^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2023, 43(06).

• 钩端螺旋体
• c-di-AMP
• 钾离子转运

目的寻找和鉴定钩端螺旋体中编码第二信使c-di-AMP结合蛋白KtrA, 并探究c-di-AMP-KtrA/B系统的功能及调控机制。方法采用PCR扩增ktrA基因并克隆入pET42a质粒获得pET42aktrA原核表达载体, 将其转入表达宿主菌中获得表达rKtrA的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ktrA。通过亲和层析法提纯上述工程菌表达的重组蛋白rKtrA后, 运用BIAcore技术检测rKtrA与c-di-AMP的结合能力。采用细菌双杂交法检测钩端螺旋体Ktr系统中KtrA与KtrB的结合能力以及外源c-di-AMP对其结合的调控机制。通过在钾离子转运功能缺失大肠埃希菌LB2003株中回补相关基因, 分析c-di-AMP-KtrA/B通路功能。结果成功构建钩端螺旋体ktrA基因原核表达工程菌, 纯化的rKtrA可与c-di-AMP特异性结合;KtrA可与KtrB发生相互作用, 该结合作用可被c-di-AMP解离;KtrA/B系统参与调控钾离子的摄取, 该系统功能受c-di-AMP负调控。结论钩端螺旋体KtrA为c-di-AMP结合蛋白, c-di-AMP-KtrA/B系统参与调控钾离子的转运。

• 单位
  中心实验室