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摘要
为建立可同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪丁型冠状病毒(PDCoV)的双重Taq Man qRT-PCR方法,本研究根据Gen Bank中的PEDV M基因及PDCo V N基因设计了两对特异性引物和探针,构建重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立其检测方法,结果显示,根据两种病毒质粒标准品构建的标准曲线的相关系数(R2)均为1,线性关系良好。该方法特异性强,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪博卡病毒(PBo V)及猪瘟病毒(CSFV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,建立的单一与双重荧光定量PCR对PEDV及PDCo V的质粒标准品检测下限均分别为4.7×101拷贝/μL和3.17×101拷贝/μL,敏感性高;对该检测方法的重复性进行验证,结果显示,该方法组内和组间的变异系数均小于3%,重复性好。利用建立的该双重Taq Man q RT-PCR检测方法分别对118份猪粪便样品进行检测,结果显示,PEDV阳性检出率为56.8%(67/118),PDCo V阳性检出率为33.1%(39/118),二者共感染率为16.1%(19/118)。本研究首次以PEDV M基因及PDCo V N基因为靶基因,建立了同时检测PEDV和PDCo V的双重Taq Man q RT-PCR,该方法具有快速、灵敏、准确、重复性高等优点,可用于这两种病毒的同时检测和快速排查。
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