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摘要
目的 PK34是一类来源于分枝杆菌噬菌体的抗菌肽，可与结核分枝杆菌表面的TDM蛋白特异性结合，从而精确杀灭结核分枝杆菌。且原核表达具有诸如表达量大、成本较低等一系列优点。本研究利用大肠埃希菌表达目的蛋白—融合抗菌肽SUMO-PK34,并纯化获得大量具有活性的融合抗菌肽。方法 从GenBank中获取抗菌肽PK34序列后进行密码子优化，通过合成引物，PCR获得带有酶切位点的抗菌肽PK34基因片段，酶切、连接后构建重组质粒并进行酶切和测序鉴定。将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21菌株中进行诱导表达，并对诱导培养温度、IPTG浓度和时间进行优化。将转化菌接种入含有kana抗性的LB液体培养基中扩大培养，在最适条件下进行诱导表达，通过AKTA-His-Ni column纯化目的蛋白，采用SDS-PAGE电泳和Western blot方法进行鉴定。结果 获得融合抗菌肽SUMO-PK34重组质粒pET-28a-SUMO-PK34,并在BL21中初步表达融合抗菌肽SUMO-PK34。经过优化，确定其最适表达条件为温度24℃,IPTG终浓度为1.0 mmol/L,时间为9 h。在优化的条件下表达重组蛋白，通过纯化，获得大量融合抗菌肽SUMO-PK34。经Western blot鉴定，表达的融合多肽相对分子质量为20×103,活性良好。结论 通过优化表达条件，使得融合抗菌肽SUMO-PK34在原核系统(大肠埃希菌)中得到高效表达，纯化获得具有活性的融合抗菌肽，对PK34的低经济成本、低时间成本的大量获取及抗结核杆菌药物的开发奠定了基础。
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