干扰UBE2N对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响

作者：于州; 胡迪; 朱菲菲; 郭益文; **林; 李新; 郭宏; 丁向彬^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (07): 60-129.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.08.0300

• 牛
• UBE2N
• 骨骼肌卫星细胞(MSCs)
• 增殖
• 细胞分化

为了探究泛素结合酶2N(ubiquitin-conjugating enzyme 2N, UBE2N)对牛骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells, MSCs)增殖和分化的影响，试验采用天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室冻存的牛MSCs建立成肌分化模型，设计UBE2N的siRNA(si-UBE2N)构建UBE2N的干扰模型，转染牛MSCs,并以转染si-NC作为对照；采用qRT-PCR和Western-blot方法分别检测转染后对UBE2N基因和蛋白表达的干扰效果；采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测si-UBE2N对牛MSCs增殖的影响；在荧光倒置显微镜下观察分化期(DM期)牛MSCs的肌管形成状态，通过qRT-PCR和Western-blot方法分别检测MSCs中肌细胞生成素(MyoG)和肌球重链蛋白(MyHC)基因和蛋白表达水平，分析转染si-UBE2N对牛MSCs分化的影响。结果表明：与对照组相比，转染si-UBE2N后UBE2N基因和蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。干扰UBE2N后经EdU染色发现，牛MSCs的增殖率显著降低(P<0.05)。转染si-UBE2N后，与对照组相比，分化期牛MSCs的分化标志因子MyoG基因相对表达量极显著升高(P<0.01),MyoG和MyHC蛋白相对表达量均极显著升高(P<0.01),光学显微镜下转染si-UBE2N的牛MSCs融合形成的肌管数量增多且直径呈增大趋势。说明干扰UBE2N可以抑制牛MSCs的增殖并促进其成肌分化。

• 单位
  天津农学院