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摘要
【目的】流感病毒感染引发机体的炎症反应及免疫稳态失衡，由此产生的细胞因子风暴(CS)是引起感染宿主死亡的主要原因。通过探究苦参碱对H9N2 AIV感染小鼠的保护作用及其调节NLRP3炎性体信号通路的特点及作用机制，可进一步完善中药抗病毒的理论依据，为新型抗病毒药物的研发奠定基础。【方法】72只8周龄BALB/c小鼠随机分为空白组(0.1 mL无菌鸡胚尿囊液)、病毒组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV)、金刚烷胺组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+100×10-6 99%金刚烷胺)、苦参碱高浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+40 mL·kg-1苦参碱)、中浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2AIV+20 mL·kg-1苦参碱)和低浓度治疗组(0.1 mL 4×105PFU/mLH9N2 AIV+10 mL·kg-1苦参碱)，每组12只，含病毒鸡胚尿囊液滴鼻构建小鼠病毒性肺炎模型，灌服或饮水给药治疗连续5 d，试验共进行7 d，观察不同组小鼠的体重变化。在第1、3、5、7天分别取3只小鼠无菌采血并处死，取小鼠肺组织进行病理组织学观察，RT-PCR检测小鼠肺组织中H9N2 NA、NLRP3 NLR基因表达情况，Western Blot检测苦参碱治疗后H9N2感染小鼠肺组织NLRP3炎性体信号通路相关蛋白表达量的变化，小鼠血清用ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-10表达量的变化。【结果】与病毒组相比，苦参碱高浓度治疗组病理组织学观察中H9N2 AIV感染小鼠肺部水肿的区域明显减少，红细胞渗出减少，炎性细胞数量减少，效果接近金刚烷胺组。7 d时苦参碱高浓度治疗组小鼠肺泡壁完好，肺泡之间分界清楚，肺组织内炎性细胞、浆细胞数量大量减少，与空白组无异；苦参碱中浓度治疗组肺组织少量出血，肺泡内无渗出液，肺泡间隔完好；苦参碱低浓度治疗组可见肺泡内红细胞渗出，大量浆细胞募集，肺泡之间出现融合现象。经过苦参碱和金刚烷胺治疗的各组小鼠肺组织中H9N2病毒基因表达量在3、5和7 d极显著降低(P<0.01)。经治疗3、5 d时，苦参碱高浓度治疗组和金刚烷胺组的NLRP3基因和蛋白表达量、TNF-α、IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01);7 d时，苦参碱高、中、低治疗组小鼠肺组织中NLRP3基因表达量极显著降低(P<0.01);5 d时苦参碱低浓度治疗组NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白和中浓度组Caspase-1蛋白表达量显著降低(P<0.05);3 d、5 d时苦参碱中、低浓度治疗组TNF-α和IL-1β蛋白表达量极显著降低(P<0.01)，苦参碱中浓度治疗组IL-10表达量极显著降低。【结论】苦参碱可在体内抑制H9N2 AIV的表达，通过下调NLRP3炎性体信号通路相关蛋白，下调TNF-α、IL-1β和IL-10的表达，减轻炎症反应，有良好的抗病毒、抗炎作用。
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