人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定

作者：李文林; 石小玉; 熊丽霞; 王志刚; 周莹; 李红

来源：中国免疫学杂志, 2008, (01): 62-64+70.

• 粘附素5
• 克隆
• 逆转录病毒载体
• NIH3T3细胞
• HUVEC细胞

目的:克隆和转染人可溶性粘附素5截短体(sCadherin5△),并检测其生物活性。方法:RT-PCR扩增Cadher-in5△cDNA,并克隆入pMSCV逆转录病毒载体,构建pMSCV/sCadherin5△,转化感受态大肠杆菌XL-blue菌株,提取、纯化和酶切质粒,测序分析sCadherin5△,转染NIH3T3细胞,mRNA和蛋白质水平检测NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,MTT方法检测sCadherin5△生物活性。结果:PCR产物约为1128bp,构建了pMSCV/sCadherin5△质粒载体,序列测定的结果与GeneBank中Cadherin5胞膜外区121bp至1248bp之间的序列一致。pMSCV/sCadherin5△转染的NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,sCadherin5△抑制HUVEC细胞体外增殖。结论:克隆、表达和分泌了具有生物活性的人sCadherin5△。

• 单位
  江西省医学生物高技术重点实验室; 南昌大学; 江西省医学科学研究所; 南昌大学医学院