山核桃实时荧光定量PCR分析中内参基因的筛选与验证

作者:赵艺蕊; 黄春颖; **涛; 徐一帆; 王建华; 邢语琳; 陶瞫宸; 黄坚钦; 李岩
来源:果树学报, 2021, 1-22.
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.202310289

摘要

【目的】筛选出山核桃中的最佳内参基因。【方法】以山核桃的根、茎、叶、柱头、果皮、胚、不同处理下的叶片及嫁接后的砧木和接穗为实验材料,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder 4种软件对10个管家基因家族(ARF、ACT1、ACT7、MPS、UBC9、CYP、60SRP、EF-1α、GAPHD和HIS)中的19个候选内参基因表达的稳定性进行综合分析。【结果】通过比较不同组织内参基因表达的稳定性,排名前五的5个基因(ARF-1、60SRP、ACT7-1、ACT1-1和UBC9-5)被选出且ARF-1和60SRP的表达最稳定。geNorm分析显示:在盐、干旱及嫁接处理后,60SRP的表达最稳定;外源喷施不同激素到山核桃叶面后,UBC9-5的表达最为稳定;综合所有组织和处理发现UBC9-5为最稳定表达的基因。NormFinder和RefFinder综合分析的结果与geNorm分析结果基本一致,而与BestKeeper分析相差较大。【结论】在山核桃的不同组织及不同实验处理中,最适的内参基因有所不同,其也受分析方法的影响。本研究为山核桃基因表达的RT-qPCR分析中的内参基因选择提供重要的理论指导。

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