基于RAPD技术鉴定广地龙

作者：黄庆; 黄海涛; 马志国; 夏传国; 李荷; 毛润乾^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(Z3): 3255-3260.

DOI：10.13417/j.gab.040.003255

• 广地龙
• RAPD
• 鉴定技术

本研究旨在建立起新的分子鉴定技术以应用于中药材市场上广地龙商品的鉴定。本研究收集广地龙及其混淆品种共5个品种，提取样品DNA，使用20个随机引物进行PCR-RAPD反应，筛选出扩增条带清晰、重复性好、多态性良好及反应程序稳定的引物用于广地龙及其混淆品种的鉴定。结果表明，最终筛选出3条引物可作为广地龙与其混淆品种的鉴别引物，分别为：引物DL05 (5’-CATCCCCCTG-3’)，得到大小约为750 bp和1 000 bp的特异性条带；引物DL12 (5’-TGAGCCTCAC-3’)，得到大小约为300 bp和500 bp的特异性条带；引物DL18 (5’-TTCCGAACCC-3’)，得到大小约为1 000 bp和1 800 bp的特异性条带。选用DL12作为扩增引物，对体系中Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度及Taq DNA聚合酶浓度进行单因素条件优化反应体系，得到最佳的RAPD反应条件：Mg2+浓度为1.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.2 mmol/L，引物浓度为0.3μmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为1.5 U。本研究使用的RAPD技术操作简单可靠，可应用于市场上广地龙及其混淆品种的鉴定，为广地龙的鉴定研究提供了科学依据。

• 单位
  广东省科学院; 暨南大学; 广东药科大学