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摘要
目的探讨RNAi干扰Twist基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖、侵袭力及E-钙黏蛋白甲基化的影响。方法培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株,分别转染siRNA-Twist(siRNA-Twist组)、阳性对照siRNAGAPDH(阳性对照组)和阴性对照错义链(阴性对照组),利用实时荧光定量PCR技术检测各转染组细胞中Twist和E-cad基因表达,Western blot法检测各转染组细胞中Twist和E-cad蛋白表达,MTT比色法检测各转染组细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测不同转染组细胞中Ecad甲基化表达。结果 siRNA-Twist组细胞中Twist mRNA和Twist蛋白表达量均低于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);siRNA-Twist组细胞中E-cad mRNA和E-cad蛋白表达量均高于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组和阴性对照组相比,siRNA-Twist组细胞转染48 h96 h时细胞增殖能力明显减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05);siRNA-Twist组细胞迁移细胞数和侵袭细胞数均低于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);MSP检测结果显示,siRNA-Twist组细胞中E-cad甲基化扩增条带呈弱阳性,表达强度显著低于阳性对照组和阴性对照组,而非甲基化扩增条带呈阳性。结论特异性抑制Twist基因表达可能通过影响E-cad甲基化而上调E-cad表达,从而抑制细胞增殖及侵袭能力,有望为喉鳞状细胞癌基因治疗提供新的靶点。
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单位中国医科大学; 平顶山市第二人民医院
