新孢子虫NcGRA2蛋白多克隆抗体的制备及其亚细胞定位

作者:金春梅; 许应天; 高旭; 吴保义; 朱奕霏; 刘士煌; 于龙政*
来源:中国病原生物学杂志, 2018, 13(12): 1372-1374.
DOI:10.13350/j.cjpb.181216

摘要

目的制备重组新孢子虫NcGRA2t全蛋白去掉信号肽多克隆抗体并纯化,研究其在新孢子虫虫体内的定位。方法用新孢子虫NcGRA2t蛋白进行体外原核表达,纯化后免疫健康BALB/c小鼠,制备抗血清,采用Western blot分析抗体特异性,采用免疫荧光法检测NcGRA2蛋白在新孢子虫处于细胞内阶段和细胞外阶段时的亚细胞定位。结果Western blot检测,制备的鼠抗NcGRA2t多克隆抗体能与新孢子虫裂解抗原发生特异性反应。间接免疫荧光分析,NcGRA2蛋白在细胞内阶段和细胞外阶段的虫体细胞质中均呈现绿色荧光。结论本研究制备并纯化了新孢子虫NcGRA2蛋白多克隆抗体,用该抗体可检测到新孢子虫NcGRA2蛋白存在虫体的细胞质中。

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