双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究

作者：任丽莉; 刘超; 刘乙蒙; 张苧兮; 肖建英

来源：中国现代医生, 2017, 55(22): 34-38+169.

• Wee1B
• 双丁酰环腺苷酸
• 蛋白激酶A
• 有丝分裂促进因子
• 小鼠受精卵

目的 探讨蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）激活剂双丁酰环腺苷酸（dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP）调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。方法将2 mmol/L dbc AMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1Bm RNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养。相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子（MPF）活性,Western blotting方法检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-p Tyr15和Wee1B-p Ser15的磷酸化水平。结果小鼠受精卵在有dbc AMP存在时,G1、S、G2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;h CG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-p Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致。结论dbc AMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件。

• 单位
  基础医学院; 锦州医科大学