北京棒杆菌E31天冬氨酸激酶突变体T361D酶学性质表征

作者：陈晨; 闵伟红^*; 张芷睿; 方丽

来源：食品研究与开发, 2018, 39(17): 153-159.

• 北京棒杆菌E31
• 天冬氨酸激酶
• 定点突变
• 酶动力学
• 酶学性质

对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)进行定点改造,为改善突变株的酶学性质,提高突变株的酶活力,削弱或解除AK的反馈抑制作用。对高度保守的T361位点进行定点突变及高通量筛选,以大肠杆菌BL21为载体,使突变体T361D在载体中实现高效表达,经分离及纯化后进行酶学性质和动力学的研究。结果表明:与野生型(wild type,WT)相比,突变体T361D Vmax提高7.63倍,最佳反应p H值降低为7.0,最佳反应温度升至30℃,半衰期延长1 h;突变体T361D在底物抑制剂赖氨酸(Lysine,Lys)存在下表现出激活作用,对金属离子Na+、K+和有机溶剂甲醇、异丙醇均表现出良好的抗性。试验为获得高产天冬氨酸族氨基酸菌株提供了参考和依据。

• 单位
  吉林农业大学