猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立

作者：严杰聪; 王帅勇; 王曼茱; 王娟; 荣新利; 邢燕茹; 虞凌雪; 周艳君; 单同领; 童武; 郑浩; 刘长龙; 童光志; 于海

来源：中国动物传染病学报, 2022, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20220424.007

• 猪圆环病毒2型
• Cap蛋白
• 同源重组
• 表达纯化
• ELISA

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白，构成病毒的核衣壳，是PCV2的主要免疫保护性抗原，在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物，通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因，并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-I中，经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-I-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达，通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达，同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明：重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合，通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法，进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院上海兽医研究所