重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

作者：张平; 赵钢勇; 陈凯; 宋月平; 康增军; 苏立凯

来源：医学研究与教育, 2012, (01): 7-11+43.

• 脑源性神经生长因子
• 间充质干细胞
• 质粒
• 转染 brain-derived neurotrophic factor
• mesenchymal stem cells
• plasmid
• transfection

目的探讨重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓间充质干细胞(MSCs)制备BDNF基因工程细胞的方法。方法将pEGFP(N1)-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电转染技术转染骨髓MSCs,经G418筛选,通过倒置荧光显微镜判断转染效率,采用Western blot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白。结果经过双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因,以EGFP为报告基因,质粒构建成功;通过电穿孔技术以及G418筛选,提高pIRESneo-EGFP-BDNF...

• 单位
  河北大学附属医院; 河北大学; 河北工程大学