双荧光素酶报告法验证乳腺癌中lncRNA PVT1为let-7c-5p的靶基因

作者：张硕; 沈泳; 高秀飞; 谢小红^*

来源：浙江医学, 2020, 42(01): 11-15.

• let-7c-5p
• PVT1
• 双荧光素酶报告法
• 乳腺癌
• 长链非编码RNA
• 微小RNA

目的探索在乳腺癌中长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)是否为let-7c-5p的靶标基因。方法利用生物信息学软件预测PVT1序列上let-7c-5p的结合位点,PCR扩增出PVT1上包含结合位点的部分原序列片段以及敲除结合位点的突变序列片段并连接到pRL-TK载体上,重组成pRL-TK-Pw和pRL-TK-Pm质粒,再与对照质粒pGL3以及let-7c-5p或微小RNA(miRNA)-NC mimics共转染至乳腺癌细胞系MCF-7细胞中。作用48h后,使用双荧光素酶检测试剂盒裂解细胞并检测荧光素酶活性。结果与对照组比较,let-7c-5p能够有效抑制含PVT1原序列的pRL-TK-Pw报告载体的荧光素酶活性,而对敲除了结合位点的pRL-TK-Pm报告载体则无明显抑制作用。结论乳腺癌中PVT1为let-7c-5p的靶标基因。

• 单位
  浙江中医药大学