结核分枝杆菌Ag85B DNA疫苗免疫效果的初步评价

作者：王娜; 刘琼; 杨雨欣; 李慧; 张炜; 马国荣; 陈耀庚; 万巧凤^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(12): 1427-1431.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003767

• 结核分枝杆菌
• DNA疫苗
• Ag85B蛋白

目的 初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tb)Ag85B DNA疫苗的免疫效果。方法 对含HSV2-gD信号肽基因和Rv1886c基因(共963 bp核苷酸序列)的重组质粒pcD-sRv1886c进行双酶切和测序鉴定。将鉴定正确的重组质粒pcD-s Rv1886c转染CHO细胞，Western blot法检测CHO细胞培养液中Ag85B蛋白的表达情况。将重组质粒pcD-sRv1886c经肌肉注射免疫C57BL/6J小鼠，共免疫2次，间隔14 d，首次免疫后14、28及42 d经小鼠眼眶后静脉丛采血，分离血清，间接ELISA法检测小鼠血清中IgG及IgG1抗体效价；首次免疫后42 d无菌取小鼠脾脏，制成单细胞悬液，流式细胞术检测分泌IFNγ+的CD4+T及CD8+T细胞比例，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果 双酶切和测序鉴定证明重组质粒pcD-sRv1886c构建正确，转染CHO细胞后表达的蛋白可与鼠抗Ag85B单克隆抗体发生特异性结合。首次免疫后14 d，重组质粒免疫组小鼠血清中IgG及IgG1特异性抗体效价分别为1∶1 720和1∶460,28 d后为1∶5 760和1∶2 560,42 d后为1∶6 080和1∶2 720。首次免疫后42 d，重组质粒免疫组和PBS阴性对照组小鼠脾细胞中CD3+CD4+IFNγ+细胞比例分别为(2.03±0.23)%和(0.14±0.02)%,CD3+CD8+IFNγ+细胞比例分别为(1.05±0.08)%和(0.13±0.01)%，差异均有统计学意义(t分别为18.38和11.58,P均<0.001)。重组质粒免疫组小鼠脾淋巴细胞SI为5.02，明显高于PBS对照组(1.06)，且差异有统计学意义(t=15.66,P <0.001)。结论 M. tb Ag85B DNA疫苗可有效诱导机体产生体液免疫及细胞免疫效应。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院