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摘要
【目的】克隆TubulinβIII基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中并检测多梳蛋白Nspc1对其活性的影响。【方法】提取小鼠畸胎瘤细胞系P19的DNA,PCR扩增TubulinβIII近端启动子片段,构建2个不同长度的p GL3basic-TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,双酶切及测序确定所扩增的DNA序列,将重组的报告基因载体与转录调控因子多梳蛋白Nspc1瞬时共转染小鼠畸胎瘤细胞系P19细胞,使用双荧光素酶报告基因检测系统检测Nspc1对TubulinβIII启动子活性的影响。【结果】鉴定结果表明构建的TubulinβIII启动子序列正确,P19细胞中双荧光素酶活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,并对转录调控因子Nspc1有应答。【结论】成功构建了TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,为进一步在多能干细胞分化模型中研究多梳蛋白Nspc1对TubulinβIII基因的表达调控机制奠定了重要基础。
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单位武警后勤学院
