融合蛋白TAT-EGFP的表达及其对膀胱癌细胞和组织的穿膜活性鉴定

作者：吴刚; 周洁; 王启辉; 聂振

来源：广西医学, 2012, (06): 653-656.

• 穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白
• 融合蛋白
• 穿膜
• 人膀胱癌细胞
• 膀胱癌组织 TAT-EGFP
• Fusion protein
• Penetration
• Human bladder cancer cell
• Bladder cancer tissue

目的构建穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白(TAT-EGFP)融合蛋白的原核表达系统,研究该融合蛋白在体外对人膀胱癌细胞(EJ细胞)和膀胱癌组织的跨膜作用。方法以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,用PCR技术扩增TAT-EGFP基因,扩增产物插入载体pET30a,构建成重组质粒pET30a-TAT-EGFP。将重组质粒转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达。表达产物用十二烷基硫钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,Ni-NTA Superflow Cartvidge亲和层析柱纯化融合蛋白。将融合蛋白TAT-EGFP加入培养的EJ细胞和膀胱癌组织,荧光显微镜观察TAT-...

• 单位
  广西医科大学第一附属医院; 广西医科大学