细毛羊皮肤毛囊miR-1298-5p的靶基因预测及验证

作者：徐晶; 姜怀志; 张桂山; 孙丽敏; 白曼; 项露杰

来源：中国畜牧杂志, 2018, 54(04): 79-82.

DOI：10.19556/j.0258-7033.2018-04-079

• 乾华肉用美利奴
• 羊皮肤毛囊
• miR-1298-5p
• FGF2
• 双荧光素酶报告基因实验

为探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,本实验以乾华肉用美利奴羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR和Western Blot对miR-1298-5p及其靶基因进行定量检测;扩增靶基因3’UTR区,构建野生型和突变型靶基因表达载体后与miR-1298-5p mimics共同转染到HEK293T/17细胞中,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1298-5p与靶基因的靶向关系。结果表明:FGF2基因3’UTR区含有miR-1298-5p结合位点,FGF2为miR-1298-5p潜在靶基因,通过核酸水平和蛋白水平定量表达规律发现miR-1298-5p与靶基因FGF2呈负相关,初步确定FGF2为miR-1298-5p的靶基因。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-1298-5p mimics能够抑制野生型FGF2的靶位点报告载体的荧光素酶活性;但当靶基因结合位点突变后,FGF2被抑制的荧光素酶活性能够得到恢复。综上,miR-1298-5p与FGF2有靶向关系,miR-1298-5p能通过负调控FGF2的表达调控羊毛囊发育。

• 单位
  长春科技学院; 吉林农业大学