藤黄可乐化学成分及其抗氧化活性研究

作者：王丽仙; 于元元; 宋孟; 王琪; 邓长生; 黄新安; 吴青业; 宋健平^*

来源：中药新药与临床药理, 2020, 31(10): 1133-1140.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2020.10.001

• 藤黄可乐
• 化学成分
• 结构鉴定
• 抗氧化活性
• Garcinianin
• THP-1细胞
• NRF2信号通路

目的研究藤黄可乐种子的化学成分及其抗氧化活性。方法采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及高效液相色谱(HPLC)等多种手段对藤黄可乐种子乙酸乙酯萃取相进行分离纯化,并根据波谱数据及理化性质鉴定化合物结构。采用2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)法和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法对所得化合物进行抗氧化活性测试。采用分子对接方法预测C1化合物(Garcinianin)与核因子E2相关因子2(NRF2)的相互结合能力。以终浓度为0、0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μmol·L-1的Garcinianin对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)细胞进行干预,以CCK8法检测THP-1细胞活力。采用脂多糖(LPS,1μg·mL-1)诱导THP-1细胞,并以25、50、100μmol·L-1Garcinianin进行干预;采用ELISA法测定THP-1细胞谷胱甘肽(GSH)含量;q RT-PCR法检测NRF2、血红素氧合酶1(HO-1)m RNA表达;Western Blot法检测NRF2蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法测定活性氧(ROS)的含量。结果从乙酸乙酯萃取相分离得到6个单体化合物,分别为C1(Garcinianin)、C2(Kolaflavanone)、C3(GB1a)、C4(GB2)、C5(Panciflavanon)、C6(山奈酚)。DPPH法测定不同化合物抗氧化活性强弱为C1>C5>C4>C6>C2>C3,ABTS法测定不同化合物抗氧化活性强弱为C1>C5>C3>C6>C2>C4,后续选择抗氧化活性最佳的C1化合物(Garcinianin)进行相关实验。Garcinianin与NRF2分子对接显示二者亲密结合。Garcinianin浓度≤100μmol·L-1时,无明显细胞毒性。与空白组比较,LPS组的THP-1细胞NRF2、HO-1 mRNA表达及NRF2蛋白表达明显下调(P<0.05),细胞上清液中GSH含量显著降低(P<0.01),ROS含量明显升高;与LPS组比较,Garcinianin各浓度组的THP-1细胞NRF2、HO-1 mRNA表达及NRF2蛋白表达均明显上调(P<0.05),细胞上清液中GSH含量显著升高(P<0.01),ROS含量降低。结论藤黄可乐中的6个化合物都具有不同程度的抗氧化作用,Garcinianin可能是通过调节NRF2信号通路,降低氧化应激来保护LPS诱导的THP-1细胞损伤。

• 单位
  广州中医药大学