C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14相互作用对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖凋亡的影响

作者：南鹤; 张锌^*; 李爽

来源：中华风湿病学杂志, 2022, 26(08): 536-2.

• 关节炎, 类风湿
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• C-Fos
• 丝裂原活化蛋白激酶14

目的探讨C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)相互作用参与调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测RA-FLS和正常成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞C-Fos mRNA和蛋白表达水平。将RA-FLS细胞分为C-Fos过表达组(转染pcDNA3.1-Myc-C-Fos质粒)、过表达对照组(转染pcDNA3.1-Myc空质粒)、C-Fos沉默组(转染siRNA-C-Fos)、沉默对照组(转染siRNA-NC)和空白对照组(未加任何处理)。细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞增殖能力, 流式细胞实验检测各组细胞凋亡的变化, 蛋白质印迹法检测各组细胞C-Fos、MAPK14、p-MAPK14、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验检测C-Fos和MAPK14在细胞中的定位关系。免疫共沉淀方法检测C-Fos-MAPK14的相互作用关系。采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析, 正态分布的数据以±s表示, 2组间比较采用独立样本t检验;多组比较采用应采用方差分析, 进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 RA-FLS细胞中C-Fos mRNA(5.37±0.91)相对表达量明显高于FLS细胞(1.46±0.32)(t=9.94, P<0.001)。C-Fos在RA-FLS蛋白水平(1.12±0.15)均显著高于FLS(0.81±0.07)(t=3.18, P=0.017)。与空白对照组和过表达对照组相比, 过表达C-Fos可显著促进RA-FLS细胞增殖, 抑制细胞凋亡率, 上调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平, 下调细胞Bax蛋白水平(均P<0.05);与空白对照组和沉默对照组相比, 沉默C-Fos可显著抑制RA-FLS细胞的增殖, 增加细胞凋亡率, 下调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平, 上调细胞Bax蛋白表达水平(均P<0.05)。间接免疫荧光实验结果表明C-Fos与MAPK14均可在RA-FLS细胞核中表达, 免疫共沉淀实验验证C-Fos与MAPK14蛋白具有相互作用。结论 C-Fos与MAPK14相互作用促进磷酸化MAPK14蛋白表达, 从而促进RA-FLS增殖, 并抑制凋亡。

• 单位
  吉林大学中日联谊医院