人snail真核表达载体构建与鉴定

作者：杨乐; 郭晓波; 陈**; 成健; 董济民; 丁海霞; 王冠杰

来源：现代生物医学进展, 2017, 17(03): 410-413.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2017.03.003

• Snail
• 重组质粒
• 载体构建

目的:构建人snail基因真核表达载体并鉴定。方法:使用RT-PCR法获取人snail基因全长c DNA,经Bam H I、Eco R I双酶切、连接,插入pc DNA3.1(+)真核表达载体,转化TOP10感受态细胞,用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆,提取质粒双酶切电泳及测序鉴定,瞬时转染siha细胞Western-blot从蛋白水平鉴定重组质粒在真核细胞内的表达。结果:pc DNA3.1-snail重组质粒经酶切电泳符合预期片段,测序鉴定插入片段与NCBI Gen Bank文库中人snail序列一致,重组质粒瞬时转染后snail蛋白表达量明显增高。结论:成功构建pc DNA3.1-snail重组质粒载体,为进一步探讨snail基因生物学功能奠定了基础。

• 单位
  西安交通大学; 西安市中心医院