脐带间充质干细胞源外泌体对瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化的作用

作者：刘璇; 高超; 夏娜; 邹东旭; 蔡宏^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(04).

• 脐带间充质干细胞
• 外泌体
• 瘢痕
• 成纤维细胞
• 转化生长因子-β/Smad通路

目的探讨人脐带间充质干细胞源外泌体(hucMSC-exo)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)生物学行为和纤维化的作用。方法培养人脐带间充质干细胞(hucMSC), 收集培养上清提取外泌体。将HKF分为对照组(NC)和实验组(Exo), 对照组在培养到70%～80%融合后, 用基础培养基处理;实验组用含hucMSC-exo的基础培养基处理, 外泌体终质量浓度为2 μg/ml, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验检测细胞增殖与迁移, 检测羟脯氨酸(HYP)含量, 并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)对各组转化生长因子β1(TGF-β1)、转化生长因子β2(TGF-β2)、SMAD家族蛋白2(Smad2)、SMAD家族蛋白3(Smad3)信使RNA(mRNA)水平进行分析。应用图像处理软件Image J和统计软件分析, 两组间比较采用Student-t检验。结果实验组吸光度值在处理后的每个时间点都低于对照组, 0 h(Exo=1.421±0.114比NC=1.403±0.104, t=0.267, P>0.05), 12 h(Exo=1.688±0.102比NC=1.730±0.073, t=0.745, P>0.05), 24 h(Exo=1.755±0.089比NC=1.829±0.036, t=1.711, P>0.05), 36 h(Exo=1.875±0.154比NC=1.955±0.183, t=0.747, P>0.05), 48 h(Exo=2.054±0.035比NC=2.110±0.067, t=1.621, P>0.05), 60 h(Exo=2.086±0.034比NC=2.126±0.042, t=1.656, P>0.05)和72 h(Exo=2.063±0.175NC=2.094±0.065, t=0.378, P>0.05)。对培养了48 h的细胞划痕区域面积进行统计分析, 实验组划痕面积为对照组0.997±0.020倍, t=0.087, P>0.05, 差异无统计学意义。实验组培养上清中HYP含量低于对照组[(15.310±1.083) μg/ml比(19.560±0.737) μg/ml, t=3.243, P<0.05), 结果差异有统计学意义。实验组TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3的表达量均低于对照组(TGF-β1=0.814±0.048比1.076±0.066, t=3.210, P<0.05;TGF-β2=0.925±0.037比1.135±0.075, t=2.657, P<0.05;Smad2=0.911±0.061比1.139±0.075, t=2.394, P<0.05;Smad3=0.913±0.038比1.043±0.025, t=2.850, P<0.05), 结果差异有统计学意义。结论 hucMSC-exo有抑制HKF增殖迁移的趋势, 并能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的纤维化。