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摘要
目的 探讨冠心病（CHD）所致不稳定型心绞痛气虚血瘀证患者外周血DNA甲基化位点/区域的差异表达谱及潜在分子机制，为冠心病病证结合研究提供科学依据。方法 根据预先确定的纳入和排除标准，将研究对象分为两组，即CHD诱发的不稳定型心绞痛组（G组）和健康对照组（J组），进行“病”分析，而不稳定型心绞痛患者进一步分为气虚血瘀证组（病例组）和非气虚血瘀证组（对照组）进行“证”分析。收集研究对象的一般资料和临床信息，空腹抽取外周静脉血，采用850K甲基化芯片检测各组DNA甲基化差异表达谱。使用Ch AMP软件（V 2.14.0）进行差异甲基化数据分析，阈值为校正后P <0.01。采用基因本体论（GO）和京都基因组百科全书（KEGG）数据库对相关映射基因进行功能和通路富集分析。结果 G组和J组比较，得出代表“病”的差异甲基化表达谱，共筛选出263个差异甲基化位点（DMPs），其中包括cg05845204、cg08906898等191个高甲基化位点和cg26919182、cg13149459等72个低甲基化位点。这些位点主要映射到148个基因，包括RNA结合基序蛋白39(RBM39)、乙酰辅酶A酰基转移酶2(ACAA2)、蛋白磷酸酶1调节亚基12B(PPP1R12B)和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(DYRK2)。GO功能富集分析结果显示DMPs基因主要富集于染色体蛋白质定位、细胞形态发生调控、钙介导信号负向调控等方面。KEGG通路分析结果提示这些基因主要富集于脂肪酸代谢和内吞途径。此外，共鉴定出23个代表“病”的差异甲基化区域（DMRs），并识别出跨膜蛋白232(TMEM232)、核糖体蛋白P1(RPLP1)、过氧化物酶体发生因子10(PEX10)和叉头蛋白N3(FOXN3)等重叠基因，GO功能主要富集于Ras蛋白信号转导的负向调节和小GTP酶介导的信号转导、负向调节等方面。病例组与对照组比较获得代表“证”的差异甲基化表达谱，共筛选出1 703个“证”相关DMPs，包括cg05573767等444个甲基化升高位点和1 259个甲基化降低位点，例如cg19938535和cg03893872。这些位点映射到1 108个基因，例如核糖体蛋白S6激酶A2(RPS6KA2)、亮氨酸重复序列16A(LRRC16A)和刺猬酰基转移酶（HHAT）。GO功能富集分析，差异甲基化位点相关基因主要富集于跨膜受体蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶信号通路、轴突发生等生物学功能。KEGG通路富集分析结果提示Rap1信号通路、5’-单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK）等信号通路参与了证候发展。研究共筛选出21个“证”相关DMRs，包括22个重叠基因，如粘蛋白4(MUC4)、三素修复核酸外切酶1(TREX1)和LIM同源盒6(LHX6)。GO富集分析发现主要参与正向调节跨膜转运、调节脂肪酸代谢和铜离子结合等分子功能。结论 本研究揭示了冠心病不稳定心绞痛气虚血瘀证患者DMPs和DMRs的甲基化特征，脂肪酸代谢、Rap1信号通路和其他分子功能的潜在表观遗传调控参与了冠心病“病”和“证”的发展。
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