慢病毒载体介导的RNA干扰对HDAC2基因表达的影响

作者：刘燕青; 黄健; 黄韻祝; 娄方方; 孔维莹

来源：贵阳医学院学报, 2015, 40(06): 581-587.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2015.06.008

• 组蛋白去乙酰化酶2
• RNA干扰
• 肝癌Hep G2细胞
• 慢病毒载体
• p LKO.1载体

目的:构建组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因的慢病毒表达载体,研究HDAC2基因在肝癌Hep G2细胞中的表达。方法:将前期构建并鉴定正确的3条重组表达质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组、2组、3组及1条阴性对照p LKO.1-HDAC2-shRNAneg和空载体对照p LKO.1,运用脂质体法分别与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共同转染人胚肾细胞293T,制备具有感染能力慢病毒颗粒;收集、纯化含病毒颗粒的上清液并感染人肝癌Hep G2细胞,设未处理Hep G2细胞为空白对照,采用Real time PCR和Western blotting检测感染48 h和72 h后Hep G2细胞中HDAC2基因mRNA和蛋白表达水平,鉴定、分析重组质粒的干扰效果。结果:与空白对照组相比,3条干扰序列转染肝癌Hep G2细胞后均能明显抑制HDAC2 mRNA的表达(P<0.05),其中以p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组的抑制率更明显,达到82.09%;3条干扰序列均能明显抑制HDAC2蛋白的表达(P<0.05),以p LKO.1-HDAC2-shRNA 1组和3组的干扰效果最明显,但两者相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:构建的重组质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA能从转录水平和蛋白水平有效抑制HDAC2基因在Hep G2细胞中表达。

• 单位
  贵州医科大学