丁基苯酞对H2O2诱导下视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

作者：邢小丽; 黄亮瑜; 张哲; 黄欣远; 王琼; 李筱荣; 东莉洁^*

来源：中华眼底病杂志, 2019, (05).

• 视网膜色素上皮
• 细胞凋亡
• 丁基苯酞
• 氧化应激

目的 观察丁基苯酞(NBP)对H2O2诱导下RPE细胞凋亡的保护作用。方法 以人ARPE-19细胞系为实验细胞,并将其分为对照组、模型组及NBP组。对照组单纯采用完全培养基培养细胞。模型组采用200 μmol/L的H2O2刺激细胞2 h,换液后给予完全培养基培养细胞。NBP组采用200 μmol/L的H2O2及1 μmol/L的NBP共同培养细胞2 h,换液后给予完全培养基联合1 μmol/L的NBP继续培养细胞。采用MTT法检测细胞受到氧化应激刺激后的细胞活力；HE染色对RPE细胞形态进行观察；Hoechst33258染色观察RPE细胞凋亡形态；线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察细胞膜电位改变及细胞早期凋亡变化；2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色观察细胞内ROS生成堆积情况；细胞免疫荧光和Western blot分析NBP对血红素氧合酶1 (HO-1 )表达的影响。结果 MTT法检测结果显示,细胞培养24、48 h,对照组(t=17.710、13.760,P<0.000 1、<0.000 1)、NBP组(t=4.857、9.225,P=0.000 7、P<0.000 1)细胞生存力均较模型组更强,差异均有统计学意义。HE染色及Hoechst33258染色观察发现,与对照组比较,模型组细胞数量明显变少,细胞形态不完整；与模型组比较,NBP组细胞数量明显增多,细胞形态更好。JC-1法检测结果显示,模型组凋亡细胞数较对照组明显增多,NBP组凋亡细胞数较模型组明显减少。DCFH-DA染色观察发现,模型组细胞内ROS堆积较对照组更多,NBP组细胞内ROS堆积较模型组更少。免疫染色观察发现,NBP组细胞的HO-1荧光强度较对照组明显增高,差异有统计学意义(t=10.270,P=0.000 5)。Western blot检测结果显示,NBP以时间依赖性的方式上调HO-1的表达水平；NBP作用4、8、12 h时HO-1相对表达量较0 h时呈明确升高趋势,差异有统计学意义(F=164.91,P<0.05 )。结论 氧化应激损伤可下调RPE细胞的生存力并诱导其出现凋亡,NBP通过上调HO-1的表达,有效提高RPE细胞抗氧化能力,减轻细胞损伤并抑制细胞凋亡。

• 单位
  天津医科大学眼科医院