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摘要
【目的】建立黄鳝种间生殖细胞移植技术体系，为开辟黄鳝异体生殖途径提供参考。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液，利用PKH26标记卵原细胞，显微注射至受体斑马鱼胚胎中，在荧光显微镜下追踪受体中的供体生殖细胞迁移、整合及增殖情况；采用组织形态学方法检测移植受体发育情况；采用半定量PCR和FISH检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3 mRNA的表达情况。【结果】黄鳝卵巢经过蛋白酶消化后，分离得到的细胞悬液浓度为2.4×106个/mL。荧光追踪PKH26标记的供体卵原细胞结果显示，在0hpt、12hpt、24hpt、48hpt均检测到供体卵原细胞存在，并且迁移至受体生殖嵴上进行整合和增殖，72hpt受体斑马鱼出膜，荧光信号丢失。组织形态学结果表明，黄鳝卵原细胞注射到受体斑马鱼胚胎中48hpt细胞质结构松散，生殖细胞由动物极向两端迁移，分化形成组织，72hpt及30dpt移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别。半定量PCR和FISH结果显示，在48hpt检测到受体鱼中有供体生殖细胞标记基因nanos3的微弱表达，72hpt及30hpt受体中无供体来源性生殖细胞标记基因nanos3表达。【结论】本研究对黄鳝卵原细胞进行了移植的初步研究，发现黄鳝卵原细胞在48hpt仍存在于受体斑马鱼胚胎内，为黄鳝异体生殖新途径的开发提供参考资料。
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