HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定

作者：李彬; 王晓静; 刘拥军; 韩忠朝; 庞天翔

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2009, (11): 991-993+997.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005200

• 促血液血管细胞生长素
• 可溶性表达
• 分离纯化
• 人脐静脉内皮细胞 hemangiopoietin(HAPO)
• soluble expression
• isolation and purification
• human umbilical vein endothelial cells(HUVEC)

目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达,产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化。采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响。结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段,成功构建重组质粒pET22b(+)-HA-PO,其表达的融合蛋白以可溶状态存在,表达量占菌...

• 单位
  实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院