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摘要
以耐有机溶剂菌库中的巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)YZ08为模板,设计相关引物克隆出糖基转移酶基因bmgt,构建工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-bmgt,诱导表达获得了糖基转移酶GTBM。His-tag标签法纯化得到电泳纯的糖基转移酶GTBM,考察pH、温度、金属离子对酶活的影响及GTBM对二甲基亚砜(DMSO)的耐受性。建立糖基转移酶GTBM蔗糖合成酶SuSy双酶耦联催化体系,优化pH、温度、DMSO浓度、蔗糖浓度、酶液添加量等参数对双酶耦联糖基化芹菜素的影响。结果发现:GTBM有着较好的DMSO耐受性,在pH 7.5、温度35℃、10%(体积分数)DMSO、20 mmol/L蔗糖、0.1 mmol/L尿苷二磷酸(UDP)、60 mU/mL GTBM和20 mU/mL蔗糖合成酶SuSy条件下,芹菜素糖基化反应的转化率在4 h达到95%,且产物单一。GTBM有着较好的DMSO耐受性、区域选择性和较高的糖基化芹菜素产率。
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