运动预处理通过外泌体介导miR-146a对大鼠缺血性脑卒中炎症反应的影响

作者：王璐; 闫冬; 夏瑞洁; 蒋彩云; 褚晶晶; 张金梅; 邓文骞^*

来源：中国运动医学杂志, 2023, 42(11): 889-898.

DOI：10.16038/j.1000-6710.2023.11.008

• 运动预处理
• 缺血性脑卒中
• miR-146a
• 外泌体

目的：通过建立8周运动预处理模型和大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠缺血性脑卒中模型，探讨运动预处理通过外泌体介导的微RNA 146a (microRNA-146a,miR-146a)对缺血性脑卒中脑组织炎症反应的影响及相关机制。方法：将60只6周龄雄性SD大鼠随机均分为非运动组和运动组。非运动组分为假手术对照组（group control,C组）和MCAO造模组（group MCAO,M组），各15只；运动组分为单纯运动组（group exercise,E组）和运动MCAO造模组（group exercise+MCAO,EM组），各15只。E组和EM组大鼠进行8周的跑台锻炼，每周运动6天，每天运动30min。8周后，M和EM组大鼠进行MCAO手术模型的制备，C组和E组进行模拟MCAO造模的假手术。在造模24 h后进行神经行为学评分；取血浆提取外泌体；取大鼠脑组织进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定脑梗死体积；尼氏染色观察大鼠神经元及尼氏小体变化；实时定量聚合酶链反应（qPCR）测定血浆外泌体和脑组织中miR-146a的含量；免疫蛋白印迹（Western Blot）测定大鼠脑组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平；双荧光素酶报告基因检测miR-146a与TRAF6的靶向关系。结果：（1）神经行为学评分显示EM组和M组较C组评分高（P<0.01,P<0.01）;EM组较M组评分低（P<0.01）。（2）TTC染色提示EM组和M组较C组和E组梗死体积大（P<0.01,P<0.01）,EM组较M组脑梗死体积小（P<0.01）。（3）尼氏染色结果表明M组较C组和E组神经元排列疏松，神经元数量减少，尼氏体着色较浅且数量减少；与M组相比，EM组的神经元数量有所增加，尼氏体数量增多。（4）qPCR检测结果显示，与C组相比，EM组和M组血浆外泌体和脑组织中miR-146a的表达量更低（P<0.05,P<0.01），同时EM组高于M组（P<0.05）。（5）Western Blot检测显示，与C组相比，EM组和M组TRAF6、NF-κB和TNF-α蛋白表达更高（P<0.05,P<0.01）；与M组相比，EM组脑中TRAF6、NF-κB和TNF-α蛋白表达较低（P<0.05,P<0.05）。（6）双荧光素酶报告基因检测表明miR-146a与TRAF6存在特异性结合位点。结论：8周运动预处理减少了缺血性脑卒中的脑梗死面积，减少大脑的受损程度，其作用机制可能是通过外泌体介导miR-146a，增加了脑组织内miR-146a表达，miR-146a靶向结合TRAF6，负调控TRAF6/NF-κB，同时降低TNF-α的表达，减轻脑组织炎症反应，从而对缺血性脑损伤产生保护作用。

• 单位
  成都东软学院; 巢湖学院; 成都体育学院