鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建

作者：刘伟; 高玉龙; 高宏雷; 王笑梅; 许修宏

来源：微生物学报, 2007, (03): 413-417.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2007.03.008

• 鸡胚成纤维细胞(CEF)
• Gateway技术
• cDNA表达文库
• 传染性法氏囊病病毒(IBDV) Chicken embryo fibroblast(CEF)
• Gateway technology
• cDNA expression library
• Infectious bursal disease virus(IBDV)

鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入...

• 单位
  东北农业大学; 兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 黑龙江省农业科学院